包装出病毒,第三代慢病毒载体系统又增加了两个安全特性：一是构建了自身失活的慢病毒载体，即删除了U3区的3’LTR，使载体失去HIV1增强子及启动子序列，即使存在所有的病毒蛋白也不能转录出RNA；已有质粒怎么慢病毒包装构建稳定细胞株已有质粒怎么慢病毒包装构建稳定细胞株一种是脂质体转染后。
1、shRNA真核表达载体构建的原装进口shRNA表达系统此shRNA数据库亦有一套原装进口的shRNA表达系统相匹配，针对每个基因的一套shRNA序列均已构建至相应的shRNA表达载体上，可直接使用,整套产品均为原装进口。此系统中，装载shRNA序列的真核表达载体，同时也是YRBIO第三代慢病毒包装系统中的穿梭载体。也就是说，如果目的细胞质粒转染效率较低，那么只需相应的慢病毒包装系统中的包装质粒、转染试剂、293T包装细胞，便可以将这些shRNA包装慢病毒，利用慢病毒的高感染效率、高表达效率、长期表达特性，更好地进行RNA干扰研究实验！
2、慢病毒载体认识慢病毒载体是指以人类免疫缺陷病毒1(HIV1)来源的一种病毒载体，慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息，是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在细胞或活体组织中表达。慢病毒载体系统由两部分组成，即包装成分和载体成分。
包装成分通常被分开构建到两个质粒上，一个质粒表达Gag和Pol蛋白，另一个质粒表达Env蛋白，其目的也是降低恢复成野生型病毒的可能。将包装成分与载体成分的3个质粒共转染细胞(如人肾293T细胞)，即可在细胞上清中收获只有一次性感染能力而无复制能力的、携带目的基因的HIV1载体颗粒。与包装成分互补，即含有包装、逆转录和整合所需的HIV顺式作用序列，同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。
3、质粒转染和病毒感染随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。1.转染的分类：物理介导、化学介导和生物介导三类途径。物理介导：电穿孔法、显微注射和基因枪法；化学介导：经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导：较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。
4、三质粒系统转染量比例如何计算4：3：1。三质粒的转染体系三种质粒的配比有许多种方式，目前MDL使用4：3：1的比例，即PxpAx2：PMD2g：PLVX（基因的质粒），10cmdish一般转染质粒的总质量为20μg，PEI的量为质粒的2.53倍（也就是50μg60μg，一般推荐按照2.5倍来），按照比例算下来，PxpAx2：PMD2g：PLVX的质量比为：（10ug：7.5ug：2.5ug）。
5、第二代慢病毒和第三代慢病毒的区别第二代慢病毒载体系统是在第一代基础的改进，在包装质粒中删去了HIV的所有附属基因。这些附属基因的去除并不影响病毒的滴度和转染能力，同时增加了载体的安全性。第三代慢病毒载体系统又增加了两个安全特性：一是构建了自身失活的慢病毒载体，即删除了U3区的3’LTR，使载体失去HIV1增强子及启动子序列，即使存在所有的病毒蛋白也不能转录出RNA；
6、已有质粒怎么慢病毒包装构建稳定细胞株已有质粒怎么慢病毒包装构建稳定细胞株一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.脂质体转染：在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔23个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,
且效率低,大概只有1%.病毒转染：先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要35天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞12天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.现在很多家公司提供构建稳定细胞株的技术服务。